МедДиагностика-2
173 subscribers
516 photos
5 links
Download Telegram
❗️❗️❗️Использование метода иммуноблот для диагностики Вируса Эпштейн-Барра.

🔴Вирус Эпштейна-Барр (Human gammaherpesvirus 4) – ДНК-содержащий вирус семейства Herpesviridae 4 типа.

⭕️Принцип метода иммуноблота.

🔺Иммуноблот – высокоспецифичный метод, сочетающий электрофоретическое разделение белков и их последующее выявление с помощью антител.

Этапы проведения

1⃣Подготовка антигенов:
- Используются очищенные белки ВЭБ (VCA, EA, EBNA), полученные из культивируемых инфицированных клеток или рекомбинантные.

2⃣Электрофорез в ПААГ (SDS-PAGE):
- Белки разделяются в геле по молекулярной массе под действием электрического поля.

3⃣Трансфер на мембрану (блоттинг):
- Белки переносятся на нитроцеллюлозную или PVDF-мембрану.

4⃣Инкубация с сывороткой пациента:
- Если в сыворотке есть антитела (IgM/IgG), они связываются с соответствующими белками ВЭБ на мембране.

5⃣Детекция:
- Добавляются вторичные антитела, меченные ферментом ❗️❗️❗️(например, пероксидазой хрена).

- После добавления хромогенного субстрата появляются окрашенные полосы в местах связывания.

6⃣Интерпретация:
- Сравнение с контрольными образцами позволяет определить наличие IgM/IgG к конкретным антигенам ВЭБ.

Преимущества иммуноблота:
🔹Высокая специфичность (меньше ложноположительных результатов, чем в ИФА).
🔹Возможность дифференцировать антитела к разным белкам вируса.
🔹Подтверждающий тест после скрининга (ИФА, ПЦР).

Недостатки:
🔻Трудоемкость (требует квалифицированного персонала).
🔻Дороже и дольше, чем ИФА.
🔻Не подходит для массовой диагностики (используется в сложных случаях).

Когда применяют иммуноблот для диагностики ВЭБ

🔸Сомнительные результаты ИФА (например, слабоположительные IgM).
🔸Дифференциальная диагностика (исключение других герпесвирусов).
🔸Подтверждение острой инфекции (IgM к VCA/EA).
🔸Оценка давности заражения (IgG к EBNA – маркер перенесенной инфекции).
🔸Диагностика хронической активной ВЭБ-инфекции (персистенция IgM/IgG к EA).

Итоги:
🦠Иммуноблот – высокоточный метод для подтверждения инфицирования ВЭБ, особенно в сложных случаях.
🔺Он позволяет различить острую (IgM), перенесенную (IgG к EBNA) и реактивированную инфекцию, что важно для клинической тактики.
🔺Из-за сложности и дороговизны его применяют после ИФА или при неоднозначных результатах.

🔬Стоимость исследования:

♻️Определение антител к вирусу Эпштейна-Барр (Epstein-Barr virus), IgМ (иммуноблот) - 3100 рублей.

♻️Определение антител к вирусу Эпштейна-Барр (Epstein-Barr virus), IgG (иммуноблот) - 3100 рублей


Взятие крови - 250 рублей
🟣Авидность антител характеризует прочность связывания специфических антител с антигенами возбудителя.

🔴Это позволяет определить степень эффективности специфического взаимодействия между молекулами антител и антигенов, скорость образования иммунных комплексов и полноту нейтрализации антигенов.

🟡Определение авидности антител класса IgG необходимо для оценки длительности первичной инфекции и дифференциальной диагностики острой и перенесенной инфекции. Это связано с тем, что в первые три-четыре месяца после инфицирования синтезируются антитела с низкой авидностью, то есть имеющие ❗️❗️слабую прочность связывания антигенов.
Затем начинается выработка антител с пограничной (средней) авидностью и высокоавидных антител.

🔴Низкоавидные антитела свидетельствуют о первичном инфицировании и инфекции в течение последних трех-четырех месяцев.
🟢Выявление антител со средней авидностью свидетельствует о присутствии антител как с низкой, так и с высокой авидностью.
🦠💉Определение антител с высокой авидностью свидетельствует о давности перенесенной инфекции не менее трех-четырех месяцев назад до момента исследования.
‼️Важно отметить, что исследование проводится при положительных результатах выявления антител к VCA антигену класса IgG.
Для достоверного выявления сроков и длительности инфицирования необходимо сочетание выявления антител к разным антигенам.

🔸🔸🔸Цель исследования:

🔸Для диагностики инфекции, вызванной вирусом Эпштейна - Барр (вируса герпеса 4 типа);
🔸для оценки длительности первичного инфицирования вирусом;
🔸для получения данных о давности инфицирования вирусом;
🔸для дифференциальной диагностики острой формы инфекции от перенесенной инфекции или её реактивации (обострения);
🔸для комплексной дифференциальной диагностики инфекции, обусловленной вирусом Эпштейна - Барр, и ангиной иной этиологии, онкологическими заболеваниями системы кроветворения, для установления причины лихорадки неясной этиологии.

Когда назначают исследование

🔴При подозрении на инфекцию, вызванную вирусом Эпштейна - Барр, и при клинических проявлениях заболеваний, обусловленных данным вирусом;
🔴при клинических проявлениях острой инфекции, вызванной вирусом Эпштейна -Барр: лихорадка, головная боль, поражение зева, нёбных, глоточных миндалин, лимфатических узлов (лимфоаденопатия), увеличение печени и селезенки;
🔴при подозрении на острую инфекцию, определении длительности текущей инфекции и получении данных о давности инфицирования вирусом.

Результаты исследования:

Выдается индекс авидности в процентах и его интерпретация.

Причины повышения:

🔶выявление антител класса IgG с низкой авидностью – свидетельствует об инфицировании вирусом Эпштейна- Барр менее трех-четырех месяцев назад до момента исследования, возможно наличие первичного инфицирования;
🔶выявление антител класса IgG с высокой авидностью – свидетельствует об инфицировании вирусом Эпштейна- Барр три-четыре и более месяцев назад до момента исследования, отсутствие первичного инфицирования.

Причины понижения:

🔷отсутствие инфицирования вирусом Эпштейна - Барр;
🔷отсутствие или снижение иммунного ответа у лиц с иммунодефицитными состояниями, пациентов после трансплантации органов, ВИЧ-инфекцией.

🔬Стоимость исследования:

Определение авидности IgG к вирусу Эпштейна-Барр (Epstein-Barr virus, EBV) (включает определение антител к вирусу Эпштейна-Барр, IgG)- 700 рублей

Взятие крови - 250 рублей.
И так:
Вирус герпеса 4 типа- вирус Эпштейн -Барр, чаще возбудитель инфекционного мононуклеоза, чаще поражает детей, НО может сработать и как онковирус, стать причиной, например, лимфом.
Наша московская лаборатория партнер КДЛ (kdl.ru) позволяет выявить вирус 4 типа в большинстве материалов (кровь, слюна, моча, мокрота, сперма и тд), определить давность заболевания и состояние иммунитета в отношении этого вируса, количество антител к разным структурам вируса.
🟣5 тип вируса герпеса Цитомегаловирус (Cytomegalovirus, CMV, ЦМВ, ЦМВИ) является причиной цитомегаловирусной инфекции человека.

🔺Характерной особенностью этой болезни является отсутствие явных признаков.

Историческая справка:

Цитомегаловирус был впервые обнаружен немецким патологом Хьюго Риббертом в 1881 году, когда он заметил увеличенные клетки с увеличенными ядрами, присутствующими в клетках младенца.
Спустя годы, между 1956 и 1957 годами, Томас Хакл Веллер вместе со Смитом и Роу независимо изолировали вирус, впоследствии известный как «цитомегаловирус». В 1990 году был опубликован первый проект генома цитомегаловируса человека, крупнейшего последовательного генома, секвенированного на тот момент.


🔺🔺🔺По статистике Всемирной Организации Здравоохранения генерализованная (распространенная) форма ЦМВ инфекции является причиной наибольшего количества смертельных случаев в мире после гриппа и ОРВИ.

✔️Причиной проявления цитомегаловирусной инфекции является ослабление иммунитета.

‼️Заболевание возникает на фоне какого-либо другого заболевания, резко снижающего иммунитет (лейкозы, злокачественные опухоли, СПИД), или после тяжелых хирургических операций, пересадки органов (трансплантации).

🔺Следствием ЦМВ инфекции могут быть поражение надпочечников, селезенки, поджелудочной железы, почек, легких, сосудов глаза, стенок кишечника, головного мозга и периферических нервов, уменьшение количества тромбоцитов и т.д.

🔺Кроме основного заболевания и ЦМВИ, ухудшение состояния больного может вызвать наслаивающаяся септическая бактериальная инфекция. 

🔺Доказано, что до 30% гепатитов неясной этиологии (причины) обусловлены поражением печени герпесвирусами, а именно цитомегаловирусом или вирусом простого герпеса.

🔺ЦМВИ относится к инфекциям, которая может поражать плод внутриутробно, приводя к рождению детей с тяжелыми неврологическими расстройствами, патологией зрительного и слухового нервов, различными соматическими повреждениями.

🔺Характер поражения плода зависит от сроков инфицирования ЦМВ инфекцией.
❗️❗️На ранних сроках (4–6 недель беременности) возможна гибель плода или самопроизвольный выкидыш.

✔️Пути передачи инфекции:

⏺️воздушно-капельный: посредством чихания и кашля;
⏺️контактно-бытовой: через поцелуи, тесный телесный контакт, незащищенный половой акт и общие предметы быта;
⏺️трансплацентарный: от матери к ребенку через плаценту.

🚼У детей цитомегаловирусная инфекция может распространяться через игрушки.

💤После попадания в организм возбудитель сохраняется на всю жизнь и обычно находится в спящем состоянии.

✔️Основные симптомы цитомегаловирусной инфекции:

🔺незначительное повышение температуры тела;
🔺признаки интоксикации организма — озноб, ломота в теле, вялость, сонливость, потеря аппетита;
🔺бледность кожных покровов;
🔺головная боль.

💢Плохое самочувствие может сохраняться 1—2 месяца после стихания острых симптомов.

🔵ЦМВ инфекция может быть врожденной и приобретенной.

🔘Врожденная цитомегаловирусная инфекция.
🤰🏼Возникает на фоне проникновения вируса от матери к плоду через плаценту с кровью.
Заражение возникает как при первичном контакте женщины с вирусом, так и на фоне реактивации возбудителя в период вынашивания ребенка.

🔘Приобретенная цитомегаловирусная инфекция.
О приобретенной форме говорят, когда инфекция проникла в организм после контакта с больным или носителем инфекции. 🔺Проникновение вируса в организм не всегда приводит к развитию заболевания — человек может стать носителем вируса. В таком случае симптомы болезни проявляются только при ослаблении иммунитета.

🔶Цитомегаловирусная инфекция может проявляться как:

🔻Острое респираторное заболевание (ОРЗ) – повышается температура тела, возникает слабость, недомогание, может беспокоить насморк, боль в горле, увеличиваются шейные лимфатические узлы.

🔻Множественное поражение внутренних органов (при генерализации процесса) – вирус может поражать любые органы, проявления болезни разнообразны.

🔻Воспаление органов мочеполовой системы у женщин и мужчин.
Заболевание может протекать без симптомов или могут быть признаки, характерые для любых воспалительных процессов половых органов: выделения из половых путей, дискомфорт, нарушение мочеиспускания, зуд, неприятный запах и др.
🔴С целью обнаружения ЦМВ инфекции проводят исследование разных материалов (кровь, моча, соскобы со слизистых, сперма и т.д.) на наличие вируса герпеса 5 типа (ЦМВИ) и (или) оценивают состояние противовирусного иммунитета, определяя антитела Ig M, Ig G к ЦМВИ в крови.

♻️Наиболее распространенным методом определения антител является ИФА (иммуноферментный анализ).

♾️Иммуноглобулины характеризуют течение инфекции.
По мере формирования иммунного ответа к инфекции антитела разных классов сменяют друг друга.
Сначала на проникновение чужеродного микроорганизма начитают вырабатываться специфичные к данному возбудителю иммуноглобулины класса М (IgM), позже специфичные иммуноглобулины класса G (IgG).

✔️Определение в крови антител
Ig М к цитомегаловирусу  проводят:

🔸Людям с подозрением на цитомегаловирусную инфекцию;
🔸Женщинам, планирующим беременность;
🔸Беременным, для исключения первичного инфицирования ЦМВ;
🔸Новорожденным, при подозрении на внутриутробное инфицирование ЦМВ.

❇️Иммуноглобулины класса М (Ig M) при инфицировании цитомегаловирусом обнаруживаются в крови первыми, через 10-15 дней от проникновения возбудителя, они указывают на острую инфекцию.
💠
После выздоровления IgM сохраняются в крови еще около 3 месяцев, иногда могут сохнаняться до 2 лет.
‼️Антитела класса M могут вновь появляться в крови при реактивации инфекции.

Наличие IgM в крови свидетельствует о текущей острой инфекции, рецидиве инфекции, или о перенесенной инфекции в течение предыдущих нескольких месяцев.

✳️Подготовка к исследованию:

✔️Можно сдавать кровь в течение дня, не ранее, чем через 3 часа после приема пищи или утром натощак.
✔️Чистую воду можно пить в обычном режиме.

🔬Стоимость исследования:

Антитела IgM к цитомегаловирусу (Cytomegalovirus) - 5️⃣5️⃣0️⃣ рублей;

Забор крови -2️⃣5️⃣0️⃣ рублей.